Fl-era ta 'wara l-epidemija, it-terminu "ittestjar tal-aċidu nuklejku" huwa familjari għalina lkoll, u sar parti mill-ħajja tagħna ta' kuljum.
Allura, taf kif l-ittestjar tal-aċidu nuklejku jiskopri l-viruses? U l-ittestjar tal-aċidu nuklejku kif jagħmel virus inviżibbli "viżibbli"?
01 X'inhu l-aċidu nuklejku
L-aċidu nukleiku huwa t-terminu ġenerali għad-DNA u l-RNA.
L-aċidu nuklejku huwa komponent essenzjali tal-ħajja kollha magħrufa fid-dinja. Id-DNA li spiss ngħidu huwa deoxyribonukleic acid. Il-materjal ġenetiku tal-koronavirus il-ġdid huwa RNA - ribonucleic acid.
Ittestjar tal-amplifikazzjoni tal-aċidu nuklejku
02 X'jiskopri eżattament l-ittestjar tal-aċidu nuklejku?
Is-sustanza għall-iskoperta tal-aċidu nuklejku hija l-aċidu nuklejku tal-virus.
Il-koronavirus il-ġdid huwa virus li fih biss RNA, u s-sekwenza speċifika tal-RNA fil-virus hija markatur li jiddistingwi l-virus minn patoġeni oħra. Is-sejbien tal-aċidu nuklejku huwa biex issir taf jekk hemmx aċidu nuklejku tal-virus barrani li jinvaduh fil-kampjun respiratorju jew fid-demm tal-pazjent biex jiddetermina jekk huwiex infettat mill-koronavirus il-ġdid. Il-maġġoranza l-kbira tas-sejbien attwali tal-aċidu nuklejku tal-koronavirus il-ġdid juża l-metodu PCR kwantitattiv fluworexxenti biex jamplifika s-sekwenza fil-mira tal-RNA virali permezz tal-PCR wara traskrizzjoni inversa.
PCR, jew reazzjoni tal-katina tal-polimerażi, hija teknika tal-bijoloġija molekulari użata biex tkabbar frammenti speċifiċi tad-DNA; tirreferi għar-reazzjoni katalizzata mid-DNA polimerażi ta 'ġeni speċifiċi jew Ir-reazzjoni ta' amplifikazzjoni rapida in vitro tas-sekwenzi tad-DNA tissejjaħ ukoll amplifikazzjoni tal-ġeni in vitro. It-teknoloġija tal-PCR kwantitattiva fluworexxenti hija li żżid sistema fluworexxenti reporter mas-sistema ta 'reazzjoni tal-PCR, u tuża l-bidla tas-sinjal fluworexxenti biex tissorvelja l-proċess tal-PCR f'ħin reali, sabiex tirrealizza l-iskoperta kwantitattiva tal-mudell inizjali.
Biex tiskopri l-aċidu nuklejku, l-ewwel pass huwa li tiġbor kampjun. Fil-preżent, l-aktar metodu ta 'kampjunar konvenzjonali huwa: uża tampuni tal-griżmejn jew tampuni tal-imnieħer biex timsaħ u tiġbor il-passaġġ respiratorju ta' fuq (farinġi jew kavità nażali); il-kampjuni miġbura se jiġu ssiġillati b'mod strett, u mbagħad jintbagħtu lill-laboratorju għall-ittestjar gradwali.
1. Estrazzjoni ta 'RNA virali
L-RNA tal-virus huwa l-ewwel estratt mill-kampjun. Żid reaġenti tal-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku mal-kampjun biex teqred il-virus u rrilaxxa l-aċidu nuklejku.
2. "Traskrizzjoni inversa" ta' RNA virali f'cDNA
Permezz tat-teknoloġija tat-traskrizzjoni inversa (RT), l-RNA tal-virus huwa "maqlub" f'DNA speċifiku li huwa aktar konvenjenti biex jinstab, jiġifieri, cDNA.
3. Amplifikazzjoni u skoperta ta 'cDNA
Fil-fatt, kemm jekk huwa swab tal-griżmejn, swab nażali jew saħansitra teħid ta 'kampjuni tad-demm, il-kontenut tal-virus fil-kampjun huwa relattivament baxx, anke f'pazjenti infettati serjament (it-tagħbija virali hija kbira); minħabba li l-partiċelli tal-virus huma żgħar wisq u l-volum tat-teħid tal-kampjuni huwa limitat, In-numru ta 'viruses li jinsabu fil-kampjun għadu żgħir wisq għall-iskoperta tal-aċidu nuklejku.
Għalhekk, bl-użu tat-teknoloġija PCR, l-ispetturi jamplifikaw il-"password" unika tal-koronavirus il-ġdid fil-kampjun sal-punt fejn it-tagħmir jista 'jsibha, sabiex jiġġudikaw jekk hijiex infezzjoni pożittiva. Il-proċess kollu tal-ħtif tal-materjal ġenetiku tal-virus huwa bħal sajd. Il-ganċ se jidentifikah u jaqbadha, sabiex il-virus ma jkollux fejn jaħbi.
Fi kliem sempliċi, huwa li jamplifika n-numru ta 'cDNA, sabiex is-cDNA jiġi replikat kontinwament, sabiex in-numru jiżdied b'mod esponenzjali.
Il-proċess standard tal-PCR huwa maqsum fi tliet passi:
Denaturazzjoni: L-użu ta 'temperatura għolja biex tissepara l-fergħat doppji tad-DNA. Ir-rabtiet ta' l-idroġenu bejn linji doppji tad-DNA jitkissru f'temperatura għolja (93 - 98 grad ).
Ittremprar: Wara li l-linji doppji tad-DNA jkunu sseparati, it-temperatura titbaxxa biex tippermetti li l-primers jorbtu mad-DNA single stranded.
Estensjoni: DNA polymerase tisintetizza linja komplementari tul il-linja tad-DNA mill-primer marbut meta t-temperatura titbaxxa. Meta t-titwil ikun komplut, jitlesta ċiklu wieħed u n-numru ta 'frammenti tad-DNA jirdoppja. Irrepeti dawn it-tliet passi 25-35 darbiet, u n-numru ta' frammenti tad-DNA jiżdied b'mod esponenzjali.
PCR double-stranded template
Waqt li s-cDNA qed jiġi amplifikat, is-sondi fluworexxenti fil-kit qed jaħdmu simultanjament. Se jirrilaxxa sinjal fluworexxenti, u kull darba li s-cDNA jiġi amplifikat, is-sinjal fluworexxenti se jiżdied ftit, u d-ditekter tal-PCR jista 'jirreġistra valur Ct ta' żieda ta 'sinjal fluworexxenti.
Il-valur Ct huwa indikatur importanti biex jiġi ġġudikat jekk l-aċidu nuklejku tal-virus huwiex negattiv jew pożittiv. L-inqas DNA inizjali, aktar ċikli PCR meħtieġa biex jintlaħaq ċertu limitu, u l-ogħla valur Ct. Bil-maqlub, iktar ma jkun hemm DNA inizjali, iktar ikun baxx il-valur Ct. L-ammont inizjali ta 'DNA jirrifletti l-ammont ta' RNA virali fil-kampjun, li mbagħad jirrifletti l-ammont ta 'virus fil-kampjun. Għalhekk, jekk il-valur Ct ma jiġix skopert jew ikun ogħla minn ċertu valur, allura l-pazjent suspettat jiġi ġġudikat bħala negattiv; jekk huwa inqas minn dan il-valur, allura l-pazjent suspettat jiġi ġġudikat bħala pożittiv.
Matul ir-reazzjoni tal-PCR, l-għażla tal-konsumabbli tal-PCR hija wkoll waħda mill-aktar fatturi importanti li jaffettwaw ir-riżultati tas-sejbien tal-aċidu nuklejku.
