Illum, ejja nitkellmu dwar element ewlieni fl-esperimenti PCR - konsumabbli. Bħala viżitatur frekwenti tal-PCR, huwa meħtieġ li wieħed jifhem il-karatteristiċi u t-terminoloġija relatati mal-konsumabbli tal-PCR.
Hemm varjetà wiesgħa ta 'konsumabbli PCR fis-suq, inklużi marki, speċifikazzjonijiet, kuluri, eċċ., Li jgħammxu. Ejja nifhmuha pass pass.
pjanċa pcr
1. Materjali
Normalment, il-materja prima tal-konsumabbli tal-PCR hija l-polipropilene. Huwa materjal inert tajjeb reżistenti għas-sħana. Il-firxa tat-temperatura tax-xogħol hija -30 sa 140 grad, li tippermettilha tiflaħ il-bidliet tal-enerġija termali matul iċ-ċiklu termali tar-reazzjoni tal-PCR, u għandha rwol tajjeb fis-siġillar u l-protezzjoni tas-sustanzi fis-sistema ta 'reazzjoni tal-PCR.
Tgħallem aktar dwar polypropylene
2. Kulur
Dawk komuni huma tubi bojod u tubi PCR trasparenti. Fl-esperimenti PCR tradizzjonali, m'hemm l-ebda differenza bejn it-tnejn. Madankollu, fl-istess esperiment f'ħin reali/qPCR, tubi bojod kienu relattivament aktar sensittivi u konsistenti għal strumenti qPCR b'qari tas-sinjal apikali (ara Figuri A u B hawn taħt). għaliex huwa bħal dan?
tubu pcr
A: valuri Ct aktar baxxi għal tubi bojod meta mqabbla ma 'tubi ċari; B: ripetibbiltà aħjar b'tubi bojod.
Id-dejta ewlenija tal-qPCR hija l-valur Ct, u s-sinjal tal-fluworexxenza huwa s-sors tad-dejta għall-kalkolu tal-valur Ct, għalhekk huwa importanti ħafna jekk il-fluworexxenza fit-tubu tistax tiġi trażmessa kompletament lid-ditekter. Il-ħajt tat-tubu abjad jipprevjeni li l-fluworexxenza tgħaddi mill-ħajt tat-tubu u tirrefrazzjoni (Figura A hawn taħt), u b'hekk tevita li l-fluworexxenza tiġi trażmessa lill-blokka tat-tisħin (jiġifieri, il-ħajt tat-toqba tal-metall fejn jitqiegħed it-tubu) u tiġi assorbita jew riflessa b'mod inkonsistenti mill-blokk. Inġabar sinjal fluworexxenti aktar b'saħħtu u kkonċentrat fil-ponta tat-tubu abjad meta mqabbel mat-tubu ċar (Figura B hawn taħt).
tubu pcr
A: It-tendenza li qed tinbidel tas-sinjal tal-fluworexxenza fit-tubu trasparenti u t-tubu abjad; B: Il-paragun tal-intensità tal-fluworexxenza wara li żżid l-istess ammont ta 'fluworexxeina.
Mela jekk qed tuża strument qPCR tal-ogħla qari, ipprova tubi bojod.
3. Kwalità (Lean jew Mhux Lean)
L-importanza tal-kwalità tal-konsum hija enfasizzata hawnhekk. Il-konsumabbli tal-qPCR għandhom ikunu ħielsa minn kontaminanti u inibituri. Pressjoni għolja u radjazzjoni ineħħu l-batterji u d-DNases, iżda mhux it-trab u r-residwi tad-DNA, li jistgħu jinibixxu r-reazzjonijiet tal-PCR jew jipproduċu amplifikazzjoni mhux speċifika. Is-sustanzi għandhom assorbenza, u anke sustanzi li jniġġsu ċkejkna jassorbu l-fluworexxenza fis-sistema ta 'reazzjoni u jaffettwaw il-ġbir ta' sinjali ta 'fluworexxenza. Intużat verżjoni esaġerata tal-esperiment biex turi l-effett tal-kontaminazzjoni tal-impurità fuq l-esperiment. Kif muri fil-figura hawn taħt, tqiegħdet impurità f'wieħed mill-bjar tar-reazzjoni tal-ottava. Kif mistenni, il-kurvi ta 'amplifikazzjoni wrew anomaliji mmarkati.
Impuritajiet fit-tubi tar-reazzjoni tal-PCR
↑ Impuritajiet fit-tubu tar-reazzjoni
8 strixxi
↑ Riżultati ta 'reazzjoni ripetuta għal 8 tubi, l-impurità tax-xellug sew "tiddevja" il-kurva.
Tfakkira: Oqgħod attent li ma tesponix il-konsumabbli għall-arja għal żmien twil. Wara li toħroġ il-konsumabbli, kun żgur li tissiġilla l-borża tal-ippakkjar malajr biex tevita li tmissha b'idejn vojta. Jekk possibbli, aħdem fuq bank nadif.
4. Kapaċità / Daqs / Fluss
Il-volum jiddetermina kemm jista’ jitgħabba kampjun (volum ta’ reazzjoni). Doża eċċessiva tista 'tirriżulta f'effiċjenza mnaqqsa tat-trasferiment tas-sħana, tixrid, jew kontaminazzjoni inkroċjata; doża baxxa jista' jirriżulta f'telf ta' kampjun evaporattiv. Il-blokka tat-tisħin tal-istrument qPCR se tiddetermina wkoll il-konsumabbli applikabbli u d-daqs tas-sistema ta 'reazzjoni applikabbli. It-throughput huwa faċli biex jinftiehem, huwa n-numru massimu ta 'kampjuni li jistgħu jitgħabbew f'esperiment wieħed. Speċifikazzjonijiet tal-kapaċità u tal-fluss komuni huma murija fit-tabella hawn taħt:
Tubu wieħed/tmien ringieli {{0}}.2mL, 0.1mL
{{0}}pjanċa tal-bir 0.2mL, 0.1mL
{{0}}plakka tal-bir 0.2mL
L-ispeċifikazzjonijiet tal-kapaċità huma wkoll ġeneralment maqsuma f'tipi standard u baxxi, kif muri hawn taħt. Il-konsumabbli ta 'profil baxx għandhom għoli aktar baxx. Dan id-disinn qasir jimminimizza l-ispazju 'l fuq mis-sistema ta' reazzjoni ("volum mejjet" - il-parti inutli), inaqqas l-effetti tal-evaporazzjoni waqt iċ-ċikliżmu termali, u jippermetti li l-modulu tat-tisħin jkebbeb madwaru sa punt akbar biex Ittejjeb l-effiċjenza tat-trasferiment tas-sħana. Għalhekk, tubi ta 'profil baxx huma magħrufa wkoll bħala tubi jew pjanċi "veloċi".
tubu pcr
Tfakkira: Il-volum ta 'reazzjoni użat komunement huwa 20 µL, u huwa rakkomandat li tuża tubu ta' reazzjoni ta 'volum żgħir ta' 0.1 mL jew volum żgħir.
5. Ħxuna tal-ħajt
Il-ħxuna tal-ħajt tat-tubu taffettwa direttament il-konduttività termali. Il-konsumabbli tal-PCR għandu jkollhom ħxuna tal-ħajt uniformi biex jipprovdu trasferiment konsistenti tas-sħana. Il-ħajt tat-tubu ultra-rqiq huwa 50 fil-mija irqaq mill-verżjoni standard, li tkompli tnaqqas il-barriera termali u ġġib effetti ta 'rispons aktar mgħaġġel u aħjar. Għalhekk, sabiex timmassimizza l-effiċjenza tar-reazzjonijiet tal-PCR u tiżgura reazzjonijiet stabbli u effiċjenti, konsumabbli PCR uniformi u ultra-rqiqa huma l-aħjar għażla.
6. Trasparenza
Tappijiet u films tas-siġillar għal qPCR jeħtieġu ċarezza ottika għolja biex jiżguraw penetrazzjoni u trażmissjoni ottimali ta 'sinjali fluworexxenti filwaqt li titnaqqas id-distorsjoni (għal strumenti qPCR top-qari). Aktar ma tkun għolja t-trasparenza tal-ħajt tat-tubu, tista 'taffettwa r-riżultati sperimentali. Ir-raġuni ġiet spjegata hawn fuq. PCR tradizzjonali jista 'jinjora din il-karatteristika.
7. Dbielet
Il-falda ta 'pjanċa PCR tirreferi għall-estensjoni periferali tal-pjanċa. Meta tibni sistemi ta 'reazzjoni, il-falda taġixxi bħala appoġġ stabbli għall-proċessi tal-pipettar u tipprovdi saħħa mekkanika u qabda meta kkombinata ma' stazzjonijiet tax-xogħol awtomatizzati. Hemm tliet tipi komuni ta 'dbielet, nofs dbielet u dbielet sħaħ (li jikkorrispondu għal A, B, u C fil-figura hawn taħt).
Skirtless: Jista 'jintuża mal-biċċa l-kbira tal-istrumenti PCR jew qPCR, iżda mhux għal applikazzjonijiet awtomatizzati. Faċli biex tiċċaqlaq waqt il-pipetta, mhux stabbli ħafna, jeħtieġ li jintuża ma 'detentur tal-pjanċa.
Nofs Dbielet: Ideali għal applikazzjonijiet awtomatizzati bi stabbiltà tajba tal-pipettar.
Full Skirt Plate: Ideali għal applikazzjonijiet awtomatizzati. Saħħa mekkanika tajba, adattata għal strumenti PCR b'moduli li jisporġu 'l barra, stabbiltà għolja waqt il-pipettar.
pjanċa pcr
Għajnuniet: Is-sinifikat tad-dublett huwa aktar biex jiffaċilita l-industrijalizzazzjoni u l-ipproċessar awtomatizzat tal-lott, flimkien mad-driegħ robotiku. Jista 'ma jkunx meħtieġ fil-laboratorji ta' riċerka tradizzjonali, l-ebda dublett mhu biżżejjed.
pjanċa pcr
8. Parafilm
Il-film tas-siġillar tal-pjanċa tal-PCR huwa magħmul minn plastik ċar jew fojl tal-aluminju. Films trasparenti adeżivi huma aktar komuni, adattati għal pjanċi ta '96 jew 384 tajjeb, u għandu jkollhom trażmissjoni tajba biżżejjed tad-dawl. Meta tissiġilla l-film, se tintuża karta żgħira biex tagħfas il-film madwar it-toqba tas-siġillar biex tevita tnixxija ta 'arja.
Films adeżivi tal-aluminju jistgħu jkunu inqas komuni. Għalkemm mhux adattat għall-qPCR, huwa l-konsumabbli ideali għal kampjuni sensittivi għad-dawl. Minħabba li jista 'jiġi ippanċjat, jiffaċilita t-trasferiment tal-kampjuni fil-PCR (għal PCR konvenzjonali).
Film tal-issiġillar tal-pjanċa tal-PCR
Agħti fil-qosor
Bħala t-trasportatur tas-sistema PCR, il-konsumabbli huma importanti ħafna biex titjieb il-kwalità tad-dejta sperimentali. Nittama li dan il-qsim jista 'jgħinek tifhem xi suġġerimenti dwar konsumabbli PCR u tipprovdi għajnuna għal għażla aħjar ta' konsumabbli.
