Modi biex tiġi evitata l-kontaminazzjoni taċ-ċelluli: Għajnuniet dwar il-pipettar li trid tkun taf
Fost il-ħafna varjabbli li huma kkontrollati fil-kultura taċ-ċelluli, varjabbli speċifika waħda taffettwa l-esperiment kollu: il-kontaminazzjoni. Fattur wieħed li jikkontribwixxi għall-kontaminazzjoni ċellulari mhux dejjem jinsab fuq ir-radar, u għalkemm jista 'skiet jaffettwa s-saħħa taċ-ċelluli u jaffettwa d-dejta tal-kejl, huwa l-kontaminazzjoni tal-pipetta.
L-għażla tal-pipetti, il-ponot tal-pipetta u l-programmi tal-pipettar jirċievu ftit attenzjoni meta jiġu ddisinjati l-esperimenti. Anke soluzzjoni kutra (awtoklavi) biex tiġi evitata l-kontaminazzjoni bil-pipetta tista 'ma tkunx effettiva daqs kemm hu maħsub komunement.
L-ewwel regola tal-kultura taċ-ċelluli: tevita l-kontaminazzjoni. Għaliex it-teknika sterili hija daqshekk importanti għal kultura taċ-ċelluli b'suċċess?
Teknika asettika hija l-uniku mod biex jinkisbu riżultati affidabbli u riproduċibbli. It-tniġġis jista' jaffettwa t-tkabbir taċ-ċelluli, il-metaboliżmu u s-saħħa -- xi ħaġa li x-xjenzati huma interessati li jistudjaw. Linji taċ-ċelluli kkontaminati m'għandhomx il-proprjetajiet mixtieqa, u jaħdmu b'mod differenti kull darba, skont is-severità tal-kontaminazzjoni. Ukoll, jekk il-kontaminanti jikbru żżejjed iċ-ċelloli ta 'interess tiegħek, tista' tispiċċa tistudja l-organiżmu ħażin.
X’tipi ta’ sustanzi li jniġġsu spiss jiltaqgħu magħhom ix-xjentisti?
Sorsi komuni ta 'kontaminazzjoni huma batterji, ħmira u moffa. Fix-xogħol tal-kultura taċ-ċelluli, l-aktar diffiċli biex jinstab u jinqered huwa mycoplasma. Tipi inqas komuni ta' kontaminazzjoni jinkludu, pereżempju, oġġetti tal-lissija tal-plastik f'oġġetti konsumabbli tal-laboratorju.
X'inhuma l-kawżi komuni tal-kontaminazzjoni taċ-ċelluli?
Sors komuni ta 'kontaminazzjoni huwa pipettar fqir, bħall-użu ta' pipetti kkontaminati u ponot mhux filtru. Barra minn hekk, in-nuqqas ta 'prattiki tajba tal-laboratorju, bħal dekontaminazzjoni inadegwata ta' strumenti bħal inkubaturi jew kabinetti tal-fluss laminari, hija wkoll kwistjoni. Biex tneħħi l-mikoplażma, hija meħtieġa filtrazzjoni bl-użu ta' filtru ta' 0.1 µm minflok filtru ta' 0.2 µm.
Tliet kontaminazzjonijiet bil-pipetta:
1. Kontaminazzjoni minn pipetta għal kampjun: Il-pipetta jew il-ponta tal-pipetta tikkontamina l-kampjun.
Kif tevita:
Uża ponot tal-filtri sterili biex tevita l-kontaminazzjoni tal-korp tal-pipetta.
Ibdel it-tarf tal-pipetta wara kull kampjun.
Awtoklavi jew sterilizza pipetti regolarment bl-etanol. Agħżel pipetta kompatibbli mal-awtoklavi.
2. Kontaminazzjoni minn kampjun għal pipetta: Il-pipettar tal-kampjun fil-korp tal-pipetta jikkontamina l-pipetta.
Kif tevita:
Uża ponot tal-filtru jew ponot ta' spostament pożittiv biex tevita li l-kampjuni jidħlu fil-korp tal-pipetta.
Waqt il-pipetta, żomm il-pipetta f'pożizzjoni vertikali. Aħżen il-pipetta wieqfa.
Mejjel il-flixkun meta tippipetta.
Erħi l-buttuna bil-mod biex tevita li t-titjir tal-kampjun fil-pipetta. Agħżel pipetta mgħammra b'funzjoni ta' eject artab.
3. Kontaminazzjoni bejn il-kampjuni: Kampjuni tal-pipettar residwi jiġu trasferiti għall-kampjun li jmiss. Normalment iseħħ meta l-istess ponta tintuża diversi drabi.
Kif tevita:
Ibdel it-tarf tal-pipetta wara kull kampjun.
Uża ponot tal-filtru jew ponot ta' spostament pożittiv biex tevita li l-kampjun jidħol fil-korp tal-pipetta u jgħaddi għall-kampjun li jmiss.
Kun żgur li l-ponta tal-pipetta tkun issiġillata fuq il-pipetta biex tevita t-tnixxija tal-kampjun. Per eżempju, il-ponta ta 'Yongyue Medical.
Hemm fatturi ta’ kontaminazzjoni li x-xjentisti lanqas biss jafu bihom?
L-effiċjenza tal-awtoklavi ħafna drabi ma tkunx verifikata, u jekk l-awtoklavi ma jkunx qed jaħdem sew, it-truf tal-pipetta awtoklavi jistgħu ma jkunux sterili. Filtri sterilizzati minn qabel imgeżwer f'ippakkjar protettiv huma l-iktar għażla sigura biex jiġu evitati inċidenti bħal dawn. Il-proċess ta 'qabel l-isterilizzazzjoni għal ponot ta' pipetti ta 'kwalità għolja huwa validat regolarment biex tiġi żgurata l-effiċjenza ta' qabel l-isterilizzazzjoni.
Kif l-għodda tal-pipettar u t-tqassim jagħmluha aktar faċli għax-xjenzati biex jimmaniġġaw il-kampjuni f'ambjent sterili?
L-għażla tal-pipetti u l-ponot tal-pipetta t-tajba tista 'tagħmel il-fluss tax-xogħol asettiku aktar faċli. Il-pipetti mediċi Yongyue huma faċli biex jitnaddfu u jinfetħu mingħajr għodda, u jħaffu t-tindif ta 'kuljum. Peress li l-awtoklavi huwa aktar effettiv biex ineħħi l-kontaminazzjoni minn msielaħ tal-etanol, il-pipetti mekkaniċi Sartorius huma kompletament awtoklavabbli, li jfisser li tista 'tiddekontamina l-pipetti tiegħek b'mod affidabbli. L-ejection tal-ponta artab tipprevjeni r-riskju potenzjali ta 'kontaminazzjoni milli titjir meta l-ponta tiġi ejected. Il-ponot tal-filtri sterilizzati minn qabel jipproteġu l-kampjuni tiegħek minn kontaminazzjoni inkroċjata. It-truf mediċi Yongyue huma ppakkjati wkoll f'ippakkjar li ma jnixxix, li jfisser li kwalunkwe kontaminazzjoni taħt kondizzjonijiet ta 'ħażna u kunsinna ma tiġix f'kuntatt mal-ponot jew kaxxa tat-tarf.
Kif jistgħu x-xjentisti jevitaw it-tniġġis? X'inhuma l-aqwa suġġerimenti tiegħek għal xogħol sterili?
L-ewwel, prattika tajba tal-laboratorju u ppjanar bir-reqqa tal-passi tax-xogħol. Kun żgur li żżomm biss dak li huwa meħtieġ għal fluss tax-xogħol speċifiku fil-kabinett tal-fluss laminari u uża kultura ta 'ċellula waħda fl-istess ħin. Barra minn hekk, ittestjar regolari għal kontaminanti bħal mycoplasma jagħtik paċi tal-moħħ u kunfidenza fir-riżultati tiegħek. Meta taħdem taħt kundizzjonijiet sterili, il-flus minfuqa fuq ponot tal-filtri sterilizzati minn qabel u reaġenti sterili jiswew il-flus.