Il-metodi ta 'operazzjoni, id-dettalji, u l-ispjegazzjonijiet teoretiċi tagħna se jsiru l-linji gwida għall-operazzjoni tiegħek, bħat-tqegħid ta' soluzzjonijiet ta 'nutrijenti u fliexken taċ-ċelluli; proċeduri ta' sterilizzazzjoni; Biex titgħallem it-tħaddim korrett tagħhom, huwa meħtieġ li tingħata attenzjoni lilhom l-ewwel darba.
It-trawwim taċ-ċelloli bħat-trobbija tat-tfal
Iċ-ċelloli huma verament fraġli. L-aħjar huwa li tiċċekkjaha kuljum biex tipprevjeni fenomeni anormali bħal nuqqas ta 'ilma, dijossidu tal-karbonju, nuqqas ta' enerġija, u temperatura insuffiċjenti fl-inkubatur. Huwa wkoll meħtieġ li dawn l-inċidenti jiġu solvuti fil-ħin biex jiġi evitat uġigħ akbar ikkawżat minn esperimenti ripetuti. .
Ċelloli tajbin għandhom jinżergħu fil-ħin
Iċ-ċelloli jgħaddu f'lottijiet sabiex anki jekk lott wieħed ifalli, ikun hemm spare. Jista 'ma jkunx faċli għall-persuna medja bħal din tal-aħħar. Imma din hi l-lezzjoni ta’ demmi. Ladarba ċ-ċelluli ġew ikkontaminati, l-armata kollha nħasset. Dak iż-żmien, jiddispjaċini li ma pproteġitx iż-żerriegħa.
Kull ċellula għandha l-karatteristiċi tagħha u għandha tiġi ttrattata b'mod differenti.
Iċ-ċelloli huma l-istess bħall-bnedmin, u ċelloli differenti għandhom karatteristiċi ta 'kultura differenti. Oqgħod attent fil-proċess tal-kultivazzjoni. Linji ta 'ċelluli differenti jużaw midja u serum differenti.
Pereżempju, iċ-ċelloli tal-muskoli lixxi li ngħolli huma attivi ħafna u jixtiequ jkunu vivaċi. Fi 2-3 jiem, se jkun hemm popolazzjoni kbira, u ma tantx inħobb niekol u nixrob. Huwa tassew l-aqwa tifel li trabbi. Iċ-ċelluli endoteljali u ċ-ċelloli tal-muskoli lixxi għandhom personalitajiet simili, iżda mhumiex iġjeniċi ħafna u sloppy. Hemm ħafna ċelluli sekretorji fihom, għalhekk jeħtieġ li jinbidlu u jinħaslu ta 'spiss. Iċ-ċelloli RAW264.7 huma wkoll ferrieħa ħafna u jittieklu ħafna. Huwa meħtieġ li jitimgħuhom spiss. L-uġigħ ta 'ras huwa li ċ-ċelloli jiġu attivati faċilment. Tajjeb li l-flixkun u l-ambjent li fih huma kkultivati huma ħielsa mill-endotossini, iżda huwa diffiċli għalija bħala omm li nissodisfahom.
Tħejjija għax-xogħol qabel it-taħriġ
Inkluż l-immaniġġjar tal-konsumabbli, il-konfigurazzjoni tar-reaġenti, l-ittestjar tal-isterilità, eċċ.
Tindif ta' oġġetti tal-ħġieġ. Għal oġġetti tal-ħġieġ (flixkun taċ-ċelluli, flixkun li fih soluzzjoni nutrittiva, flixkun żgħir tal-peniċillina, eċċ.), l-ewwel uża trab tal-ħasil biex tnaddaf (oqgħod attent għall-kantunieri mejta), u mbagħad laħlaħ. Xarrab f'soluzzjoni ta 'aċidu għal aktar minn 24 siegħa, imbagħad laħlaħ b'ilma nadif 10 darbiet biex tneħħi s-soluzzjoni ta' aċidu residwu. Fliexken, eċċ., ħawwad bil-qawwa waqt it-tlaħliħ. Imbagħad mxarrba f'ilma distillat doppju għal 24 siegħa. Wara t-tnixxif, wrapha u nixxef f'160 grad għal sagħtejn.
Konfigurazzjoni tar-reaġent. Bħala likwidu għall-kultura taċ-ċelluli, ġeneralment, jista 'jintuża aktar minn ilma distillat darbtejn. U tagħti attenzjoni għall-aġġustament tal-valur tal-pH.
Ittestjar ta 'sterilità. Prinċipalment uża sterilizzazzjoni tal-filtru: bħal trypsin, antibijotiċi, soluzzjoni G-418, midja varji, piruvat tas-sodju, glutamina, eċċ. Xi wħud jistgħu jiġu awtoklavati: PBS, D-Hank's, eċċ.
Ir-reaġenti huma maħżuna f'alikwoti
Inkluż soluzzjoni nutrittiva, pankreatin, serum, eċċ.
Serum huwa speċjalment importanti. Is-serum għandu jinħażen fi -20 grad . Jekk flixkun wieħed ma jistax jintuża kull darba, 40-50ml jistgħu jitqassmu fi fliexken sterili trattati bl-aċidu, jew saħansitra jinħażnu fi fliexken tal-peniċillina. Ġeneralment, is-serum ipprovdut mill-manifattur huwa sterili u ma jeħtieġx filtrazzjoni sterili. Jekk jinstab ħafna materja sospiża fis-serum, is-serum jista 'jiġi miżjud mal-medju u ffiltrat flimkien, u s-serum m'għandux jiġi ffiltrat direttament. (L-ebda effett fuq il-kultura taċ-ċelluli f'ċirkostanzi normali)
Is-serum ibbottiljat għandu jinħall gradwalment: friġġ ta '4 gradi jinħall kompletament u mbagħad jinqasam f'ippakkjar. Matul il-proċess ta 'dissoluzzjoni, għandu jitħawwad regolarment (oqgħod attent li ma tikkawżax bżieżaq tal-arja) biex it-temperatura u l-kompożizzjoni jkunu uniformi u titnaqqas l-okkorrenza ta' preċipitazzjoni. Tħollx direttament minn –20 grad sa 37 grad, peress li t-temperatura tinbidel wisq, li faċilment tista 'tikkawża koagulazzjoni u preċipitazzjoni tal-proteini.
L-inattivazzjoni tas-sħana tirreferi għat-tisħin tas-serum imdewweb għal kollox f'56 grad għal 30 minuta. Wara li l-banju ta 'l-ilma jogħla għal 56 grad, poġġi s-serum, stenna li t-temperatura titla' għal 56 grad u għodd il-ħin, ġeneralment ħawwad b'mod ugwali darba kull 5 minuti jew hekk. L-iskop ta' dan it-trattament bis-sħana huwa li jiġu diżattivati l-komponenti tal-kompliment fis-serum. Sakemm ma jkunx meħtieġ, dan it-trattament tas-sħana ġeneralment ma jitwettaqx minħabba li jikkawża żieda sinifikanti fis-sediment u jaffettwa l-kwalità tas-serum. Oqgħod attent għall-effett tal-bidla tas-serum (inklużi lottijiet differenti) fuq iċ-ċelloli.
Sens qawwi ta 'sterilità
Qabel l-esperiment, il-bank ultra-nadif ġie sterilizzat b'irradjazzjoni tad-dawl UV għal 30 minuta, il-wiċċ tal-operazzjoni asettika kien jintmesaħ b'70 fil-mija etanol, u l-fann tal-bank ultra-nadif inxtegħel għal ftit minuti qabel ma bdiet l-operazzjoni sperimentali .
Biex titgħallem aktar dwar il-kultura taċ-ċelluli tal-laboratorju, jekk jogħġbok ikklikkja: http://www.shjasw.com/
