It-teknoloġija pcr hija simili għall-proċess ta' replikazzjoni naturali tad-DNA, u l-ispeċifiċità tagħha tiddependi fuq primers oligonukleeotide komplementari għaż-żewġt itruf tas-sekwenza fil-mira. Il-PCR jikkonsisti fi tliet stadji bażiċi ta' reazzjoni: denaturazzjoni, ittemprar, u estensjoni. Dan il-proċess ta' reazzjoni jitwettaq fil-kontenitur tar-reazzjoni pcr. Bl-iżvilupp kontinwu tal-istrument tal-amplifikazzjoni tal-ġeni, il-kontenitur tar-reazzjoni esperjenza wkoll l-iżvilupp gradwali tat-tubu ċentrifuga minn 1.5ml sa 0.2ml (0.25ml) għall-0.2ml b'ħitan irqaq iddedikati għall-PCR. , tubu ta '0.1mlpcr. Biż-żieda fin-numru ta 'reazzjonijiet ta' amplifikazzjoni pcr, kontenituri ta 'amplifikazzjoni tal-ġeni ta' fluss għoli għal strixxi PCR u pjanċi PCR huma ffurmati gradwalment.
Il-PCR jikkonsisti fi tliet stadji bażiċi ta' reazzjoni: estensjoni ta' denaturazzjoni-ittemprar
Denaturazzjoni tad-DNA tal-mudell:
Wara li l-mudell tad-DNA jissaħħan għal madwar 94 °C għal ċertu perjodu ta 'żmien, id-DNA b'żewġ fergħat tal-mudell DNA jew id-DNA b'żewġ fergħat iffurmati minn amplifikazzjoni tal-PCR huwa dissoċjat, sabiex ikun jista' jiġi kkombinat mal-primer biex jipprepara għar-rawnd ta 'reazzjoni li jmiss.
Ittemprar (renatament) tad-DNA tal-mudell bil-primers:
Wara li d-DNA tal-mudell jiġi snaturat f'linja waħda bit-tisħin, u t-temperatura titbaxxa għal madwar 55 °C, il-primers huma mqabbla mas-sekwenza komplementari tal-fergħa waħda tad-DNA tal-mudell.
Estensjoni ta' primers:
Taħt l-azzjoni ta 'Taq, il-konjugat tal-mudell-primer tad-DNA juża dNTP bħala l-materja prima tar-reazzjoni biex jissintetizza katina ġdida ta' replikazzjoni semi-riżervata komplementari għall-katina tad-DNA tal-mudell skont il-prinċipju ta 'tqabbil bażi u replikazzjoni semi-riżervata.
Prinċipji Bażiċi tat-Teknoloġija pcr
It-teknoloġija tiddependi fuq reazzjoni ta 'sinteżi enżimatika ta' polymerase tad-DNA fil-preżenza ta 'DNA tal-mudell, primers u erba' deoxyribonucleotides.
Il-polimerażi tad-DNA tuża DNA b'fergħa waħda bħala mudell biex tibda sinteżi b'biċċa żgħira ta 'DNA b'żewġ fergħat. Primer oligonukleotidi sintetiku wieħed jew tnejn huma kkombinati ma' sekwenza komplementari fil-mudell tad-DNA b'fergħa waħda biex jiffurmaw DNA parzjali b'żewġ fergħat.
Taħt temperatura u ambjent xierqa, il-polimerażi tad-DNA iżżid id-deossimononucleotide mat-tarf 3'-OH tal-primer, u tuża dan bħala l-punt tat-tluq biex testendi tul id-direzzjoni tal-mudell ta '5'→3' tal-mudell biex tissintetizza strand komplementari ġdid tad-DNA.
Id-differenza bejn tubi PCR u tubi ċentrifugi
Tubi TAL-PCR:
Il-pjanċa tar-reazzjoni PCR hija 96-well jew 384-well, li hija ddisinjata apposta għal reazzjonijiet tal-lott. Il-prinċipju huwa li l-fluss tal-magna PCR u s-sekwenzar huwa ġeneralment 96 jew 384.
Tubu taċ-ċentrifuga:
It-tubu taċ-ċentrifuga mhuwiex neċessarjament tubu PCR. Hemm ħafna tipi ta 'tubi ċentrifugi skond il-kapaċità tagħhom. Dawk użati komunement huma 1.5ml, 2ml, 5ml, 15 jew 50ml, u l-iżgħar waħda (250ul) tista 'tintuża bħala tubu PCR.
Kif tagħżel tubi PCR
Aħna għażilna li npoġġu t-tubi PCR bit-tama li nagħżlu l-iktar post preċiż għat-temperatura.
L-iktar pożizzjoni preċiża tat-temperatura għandha tkun il-pożizzjoni 'l fuq mis-sensur tat-temperatura taħt il-modulu (irrispettivament mit-temperatura mhux eżatta tas-senser).
Il-pożizzjoni tas-sensur tat-temperatura ta 'strumenti PCR differenti hija differenti.
Pereżempju, l-2720 ta 'AB għandu wieħed biss fin-nofs, l-200 ta' MJ għandu tliet sensuri, li huma aktar baxxi tax-xellug, tan-nofs u tal-lemin ta 'fuq, Eppendorf għandu jkun fir-ringiela A jew H, u Dongshenglong 811 għandu tliet sensuri tat-temperatura, B1-2 għandu jintgħażel, C1-2, C6-7, D6-7, B11-12, C11-12, minħabba li dawn il-punti huma punti puntwali tat-temperatura.