Sejbien tal-PCR
Reazzjoni tal-katina tal-polimerażi (PCR) tuża biċċa DNA bħala mudell, u bil-parteċipazzjoni ta 'DNA polimerażi u sottostrat tan-nukleotidi, id-DNA hija amplifikata għal ammont suffiċjenti għal analiżi strutturali u funzjonali. Il-metodu ta 'skoperta PCR għandu sinifikat estremament importanti fid-dijanjosi klinika rapida ta' mard infettiv batteriku.
Il-prinċipju tal-PCR jintuża biex jamplifika framment tad-DNA li jinsab bejn żewġ sekwenzi magħrufa, simili għall-proċess ta 'replikazzjoni tad-DNA naturali. Il-molekula tad-DNA li trid tiġi amplifikata tintuża bħala mudell, u par frammenti ta' oligonukleotidi komplementari għat-tarf 5'tarf 3'tal-mudell huma użati bħala primers. Taħt l-azzjoni tad-DNA polymerase, issegwi l-mudell skont il-mekkaniżmu ta 'replikazzjoni nofs riservat. Estensjoni tal-katina sat-tlestija tas-sinteżi tad-DNA ġdida, irrepeti dan il-proċess, il-framment tad-DNA fil-mira jista 'jiġi amplifikat.
(PCR) huwa metodu biex jiġu sintetizzati b'mod enżimatiku frammenti speċifiċi tad-DNA in vitro. Tikkonsisti f'diversi passi ta 'denaturazzjoni f'temperatura għolja, ittemprar f'temperatura baxxa, u estensjoni ta' temperatura xierqa. Karatteristiċi bħal sensittività għolja, tħaddim faċli, u iffrankar ta 'ħin. Jista 'jintuża mhux biss fir-riċerka bażika bħal iżolament tal-ġeni, klonazzjoni u analiżi tas-sekwenza tal-aċidu nuklejku, iżda wkoll fid-dijanjosi ta' mard jew kwalunkwe post fejn hemm DNA u RNA. Reazzjoni tal-katina tal-polimerażi (Polymerase Chain Reaction, PCR fil-qosor) hija magħrufa wkoll bħala klonazzjoni molekulari mingħajr ċelluli jew sekwenza speċifika tad-DNA in vitro teknoloġija ta 'amplifikazzjoni enżimatika diretta-primer.
Ir-replikazzjoni semi-riservata tad-DNA hija mod importanti għall-evoluzzjoni u l-passaġġ bijoloġiċi. Id-DNA doppju jista 'jiġi żnaturat u mdewweb f'linja waħda taħt l-azzjoni ta' varjetà ta 'enzimi. Bil-parteċipazzjoni ta 'DNA polymerase u promotur, id-DNA double-stranded jista' jiġi replikat fl-istess żewġ molekuli skond il-prinċipju ta 'tqabbil ta' bażi komplementari. Fl-esperimenti, instab li d-DNA jista 'wkoll jiġi żnaturat u mdewweb f'temperaturi għoljin, u jista' jerġa 'jiġi rinaturat fi linji doppji mill-ġdid meta t-temperatura titbaxxa. Għalhekk, billi tikkontrolla d-denaturazzjoni u r-rinaturazzjoni tad-DNA permezz ta 'bidliet fit-temperatura, u tfassal primers bħala promoturi, iż-żieda tad-DNA polymerase u dNTPs tista' tlesti r-replikazzjoni in vitro ta 'ġeni speċifiċi.
Il-punt sempliċi huwa li tuża tagħmir speċjali, uża dNTPS, Mg2+, primers speċifiċi, polimerażi tad-DNA, u sistema buffer, żid template, li huwa l-kampjun tad-DNA għall-amplifikazzjoni in vitro, u twettaq elettroforesi. Jekk jista 'jiġi amplifikat, u d-daqs tal-prodott amplifikat Konsistenti mal-faxxa fil-mira, dan ifisser li l-primer u l-mudell huma speċifiċi, u l-indiċi ta' skoperta huwa pożittiv.
Metodi u passi ta' skoperta ta' aċidu nuklejku tal-PCR
L-ittestjar tal-aċidu nuklejku jeħtieġ ħames passi: teħid ta 'kampjuni, żamma tal-kampjuni, żamma, estrazzjoni tal-aċidu nuklejku, u ttestjar tal-kompjuter.
Sejbien ta 'aċidu nuklejku
L-ewwel pass huwa li tiġbor tnixxijiet umani u timsaħ il-kavità nażali jew il-ħajt ta 'wara tal-farinġi u t-tunsilli farinġi bilaterali b'test nażali jew test tal-farinġi.
Fit-tieni pass, il-persunal mediku żamm il-kampjun, mgħaddas ir-ras tal-biċċa tat-test fis-soluzzjoni tal-preservazzjoni taċ-ċelluli, u kamin l-għatu tat-tubu immedjatament wara li tkisser id-denb.
Fit-tielet parti, poġġi l-kampjun f'borża mitbuqa, żommha u ibgħatha għall-ispezzjoni fil-ħin.
Ir-raba 'pass huwa li tibgħat il-kampjun lil-laboratorju biex jiġi estratt l-aċidu nuklejku.
Fil-ħames pass, l-estratt huwa soġġett għal reazzjoni ta 'amplifikazzjoni tal-PCR fluworexxenti.
Jeħtieġ ukoll xi konsumabbli u strumenti
Strument tal-PCR, Tubu tal-PCR, Ponta tal-Pipetta, Pjanċa tal-Bjar Fond, Ġibjun, u reaġenti miżjuda
