Kif nafu lkoll, it-tipi ta 'ċelloli kkultivati fil-laboratorju jistgħu jinqasmu bejn wieħed u ieħor f'żewġ tipi: ċelloli aderenti u ċelloli ta' sospensjoni, u jeżistu biss ftit tipi ta 'ċelloli fiż-żewġ stati.
Iċ-ċelloli ta 'sospensjoni jirreferu għal tip ta' ċelloli li jistgħu jikbru fi stat sospiż f'mezz mingħajr ma jiddependu fuq appoġġi, bħal limfoċiti u l-biċċa l-kbira taċ-ċelloli derivati mis-sistema tad-demm. (bħal ċelluli tal-lewkimja tal-ġrieden WEHI-3, ċelluli tal-lewkimja tal-bniedem K-562, HL-60). Fl-industrija, aktar u aktar ċelloli aderenti ġew domestikati u kkultivati f'sospensjoni sħiħa. Fil-preżent, iċ-ċelloli SP2/0, NS0, CHO, BHK u HEK293 jintużaw prinċipalment fl-industrija, u jintużaw prinċipalment għall-produzzjoni ta 'proteini rikombinanti; iċ-ċelloli tal-passaġġ komunement użati fi prodotti bijoloġiċi veterinarji jinkludu prinċipalment ċelloli BHK21 ikkultivati f'sospensjoni sħiħa, ċelloli MDCK; u ċelloli Vero, ċelloli PK, ċelloli ST, ċelloli Marc145, eċċ bl-għajnuna ta 'kultura ta' sospensjoni ta 'microcarrier, kull ċellula għandha karatteristiċi differenti.
Ċelloli ta' sospensjoni
Ċelloli ta' sospensjoni "thp-1" 200x
B'mod ġenerali, iċ-ċelloli tas-sospensjoni huma aktar faċli biex jimmaniġġaw minn ċelloli aderenti minħabba li l-ebda tripsinizzazzjoni mhi meħtieġa għall-mogħdija taċ-ċelloli tas-sospensjoni. Iżda dan ma jfissirx li ċ-ċelloli tas-sospensjoni huma aktar faċli biex jikbru minn ċelloli aderenti. Għan-novizzi, huwa aktar ta 'sfida. Dejjem hemm diversi problemi: pereżempju, għaliex iċ-ċelloli mejta u d-differenzjazzjoni taċ-ċelluli dejjem jidhru; huwa miftiehem li s-silta hija faċli, iżda r-riżultat ikun id-divrenzjar; problemi jerġgħu jidhru wara krijopreservazzjoni u rkupru!
Sussegwentement, ejja niddiskutu xi punti ewlenin dwar il-kultivazzjoni taċ-ċelloli tas-sospensjoni ~
Punt 1: Biżżejjed paċenzja, huwa meħtieġ ħafna
Ħafna ċelluli ta 'sospensjoni għandhom vijabbiltà relattivament fqira meta jkunu għadhom kif ġew irkuprati mill-krijopreservazzjoni. F'dan iż-żmien, irridu nkunu pazjent biżżejjed biex nistennew li ċ-ċelloli jlestu l-awto-tiswija tagħhom u jidħlu fil-fażi ta 'tkabbir logaritmiku. Pereżempju, THP-1 (lewkimja monoċitika umana) ħafna drabi teħtieġ 7-10 jiem ta' perjodu ta' rkupru minn tidwib sal-proliferazzjoni normali; Jurkat, Klonu E6-1 (ċelluli tal-lewkimja limfoċitika T tal-bniedem) jeħtieġu wkoll 5-7 ijiem wara l-irkupru. Ritorn lejn l-istat qabel l-iffriżar. In-novizzi jistgħu jieqfu mit-taħriġ matul dan il-perjodu, għalhekk jekk jogħġbok kun aktar paċenzjuż! Il-kultivazzjoni ta 'ċelluli bħal dawn huwa wkoll proċess ta' kultivazzjoni tal-paċenzja!
Punt 2: Aqbad id-densità tat-tilqim
B'mod ġenerali, id-densità taċ-ċelluli tas-sospensjoni m'għandhiex tkun inqas minn 500,000/ML. Ħafna ċelluli ta 'sospensjoni huma dipendenti mid-densità, u n-nonproliferazzjoni kkawżata minn densità baxxa hija wkoll waħda mill-problemi komuni għan-novizzi. Naturalment, hemm ftit ċelluli li l-istat tagħhom isir agħar meta d-densità tkun għolja, bħal W6/32 (ċelluli tal-ibridoma taċ-ċelluli B tal-ġurdien). Għalhekk, huwa importanti ħafna li tfittex informazzjoni rilevanti biex taqbad il-karatteristiċi taċ-ċelloli qabel ma jiġu kkultivati ċelloli mhux magħrufa. Biss billi tkun taf lilek innifsek u lill-ghadu tista 'tirbaħ il-battalji kollha!
Il-frekwenza tas-sostituzzjoni tal-medja m'għandhiex tkun limitata għal "b'mod ċar". Iċ-ċelloli huma affarijiet ħajjin. Matul ċiklu ta 'kultura kontinwu, nutrijenti speċifiċi bħal medju supplimentari u glukożju jistgħu jiġu miżjuda diversi drabi skont l-istatus tat-tkabbir taċ-ċelloli biex jinżamm stat ta' tkabbir tajjeb taċ-ċelloli. . Matul il-proċess ta 'kultura ta' sospensjoni, bil-proliferazzjoni taċ-ċelloli, il-konsum ta 'nutrijenti fil-medju oriġinali u ż-żieda tal-metaboliti, il-vijabbiltà taċ-ċelloli tonqos, u s-suppliment f'waqtu ta' nutrijenti se jagħmel iċ-ċelloli f'ambjent ta 'għajxien relattivament tajjeb. Mhux se nidħol fid-dettalji hawn, u nevita ċentrifugazzjoni frekwenti u sostituzzjoni tal-likwidu.
Ejja nitkellmu dwar il-metodu ta 'sostituzzjoni tal-likwidu:
①Metodu ta 'skambju likwidu sħiħ ċentrifugali
Jiġifieri, neħħi l-medium il-qadim kollu permezz ta' ċentrifugazzjoni (800-1000rpm, 5min), u ibdel b'medja friska. Dan il-metodu huwa adattat għal sostituzzjoni medja ta 'ċelluli ta' sospensjoni "solidi tal-ġilda" mqajma sew (bħal K562), jew is-sitwazzjoni attwali fejn iċ-ċelloli huma f'kondizzjoni tajba u d-densità hija għolja, li tirriżulta f'konsum kbir ta 'medja. Il-vantaġġ ta 'dan il-metodu huwa li l-medju jinbidel sewwa u xi debris taċ-ċelluli jista' jitneħħa, iżda se jikkawża wkoll ċertu grad ta 'ħsara mekkanika liċ-ċelloli.
②Metodu ta 'skambju nofs ċentrifugali
Jiġifieri, billi tiċċentrifuga (800-1000rpm, 5min) 50 fil-mija tas-sospensjoni taċ-ċelluli, ibdel 50 fil-mija tal-volum tal-medja friska. Dan il-metodu huwa adattat għat-tqabbil ta 'ċelluli "ipokriti" diffiċli għall-kultivazzjoni (bħal thp-1), jew is-sitwazzjoni fejn id-densità hija baxxa iżda aktar debris jeħtieġ li jitneħħa fl-istat ta' aġġustament.
③Metodu ta 'skambju likwidu tas-sedimentazzjoni
Jiġifieri, minflok ma tuża ċentrifuga, il-metodu ta 'sedimentazzjoni naturali bil-gravità jintuża biex jissepara l-mezz miċ-ċelloli, sabiex jissostitwixxi l-mezz frisk kollu jew parti minnu. Madankollu, għandu limitazzjonijiet ta 'applikazzjoni — huwa adattat biss għal ċelloli li jistgħu jiffurmaw gruppi ta' ċelluli ta 'ċertu daqs (inkella ma jistgħux joqgħodu b'mod naturali u jistgħu jiġu ċentrifugati biss b'veloċità baxxa), speċjalment meta jittrattaw ma' ċelloli li jiddependu fuq l-aggregazzjoni taċ-ċelluli biex jipproliferaw. , bħal NK-92, NK- 92 MI, Jurkat. Dan il-metodu jista 'jimminimizza l-ħsara mekkanika kkawżata mill-proċess ta' ċentrifugazzjoni matul il-proċess ta 'skambju likwidu, filwaqt li jżomm il-massa taċ-ċelluli aggregata, u t-tneħħija ta' debris taċ-ċelluli hija relattivament bir-reqqa.
Wara li tikkontrolla l-punti ta 'hawn fuq, flimkien ma' żerriegħa taċ-ċelluli tajba, huwa l-kantuniera biex jikbru ċelluli ta 'sospensjoni "sbieħ"!
pjanċa tal-kultura taċ-ċelluli
Il-pjanċa tal-kultura taċ-ċelluli f'forma ta 'U ta' Yongyue Medical tintuża l-aktar għall-kultivazzjoni ta 'ċelluli ta' sospensjoni, bl-użu ta 'polistirene ta' grad mediku (PS), prodott f'workshop ta 'purifikazzjoni ta' 100,000-livell, sterilizzat bl-irradjazzjoni, ħieles minn DNase, RNase, u piroġenu ħielsa, Sigurtà u protezzjoni ambjentali.
Il-pjanċi tal-kultura taċ-ċelluli huma disponibbli f'diversi speċifikazzjonijiet biex jissodisfaw il-ħtiġijiet ta 'diversi kulturi batterjali. It-tipi ta' prodotti huma maqsuma fi 6-tajjeb, 12-tajjeb, 24-tajjeb, 48-tajjeb, 96-tajjeb, u 384-tajjeb, ta' li 96-tajjeb huwa maqsum f'qiegħ ċatt, qiegħ U, qiegħ V; Il-pjanċi tal-kultura f'forma ta 'U jintużaw l-aktar għall-kultivazzjoni taċ-ċelloli tas-sospensjoni; Pjanċi tal-kultura b'forma ta 'V jintużaw l-aktar għal esperimenti ta' emagglutinazzjoni immunoloġika.
