Għal dixx Petri tal-qiegħ tal-ħġieġ komuni fis-suq, normalment issir toqba fil-qiegħ ta 'dixx petri tal-plastik, u mbagħad ħġieġ għatu jew slide taċ-ċelluli bi ħxuna ta' 170-220 μm hija mwaħħla mal-qiegħ tal- dixx petri b'kolla bla dell jew ġel tas-silika. Mhux il-qiegħ kollu tad-dixx petri huwa magħmul mill-ħġieġ. Iż-żona adattata għall-osservazzjoni hija biss fiż-żona tal-perforazzjoni. Madankollu, minħabba l-idrofobiċità tal-ħġieġ, meta jikkultivaw iċ-ċelloli, iċ-ċelloli ma jistgħux jaderixxu sew mal-ħġieġ, u l-istat tat-tkabbir mhuwiex tajjeb, u anke l-fenomenu tad-delaminazzjoni taċ-ċelluli jseħħ waqt l-immaġini tal-iskannjar konfokali.
Sabiex iċ-ċelloli jaderixxu sew, huwa meħtieġ li jiġi kkonfermat li reaġenti speċifiċi tal-proteini ġew miksija qabel ma jintużaw dixxijiet tal-qiegħ tal-ħġieġ għall-kultura taċ-ċelluli.
quilt do-it-yourself
Kulturi taċ-ċelluli differenti jeħtieġu reaġenti differenti tal-kisi. Fl-istess ħin, minħabba li l-proteina użata għall-kisi hija prodott bijoloġiku, il-purità tal-prodott u d-dożaġġ tal-proteina tal-kisi ta 'kumpaniji differenti huma differenti. Din il-kariga teknika hija biss għal referenza. Id-dożaġġ speċifiku tar-reaġenti tal-kisi għandu jirreferi għall-istruzzjonijiet tal-marki użati. . U huwa aħjar li tagħmel esperiment gradjent bir-reaġenti li tuża biex issib l-aktar konċentrazzjoni ta 'kisi adattata.
Hawn hu eżempju ta' Poly-L-Lysine (PLL, sigma, P4832, 100ug/ml):
Il-kisi PLL huwa adattat għall-maġġoranza l-kbira taċ-ċelloli, speċjalment għall-kultura tan-newroni fis-sistema ċentrali. Huwa meħtieġ li jsir il-kontenut ta 'proteina (ug/cm2) għal kull unità ta' żona biex jintlaħaq l-ammont mixtieq waqt l-użu. L-ammont rakkomandat ta 'kisi għal PLL f'dan l-eżempju huwa 2 ug/cm2. Huwa meħtieġ li jiġi kkalkulat l-ammont ta 'proteina meħtieġ skond iż-żona tal-kisi u l-volum tal-kisi.
Pereżempju: dixx Petri tal-qiegħ tal-ħġieġ ta '35mm, iż-żona tat-tkabbir taċ-ċelluli hija 3.5cm2, iż-żona tal-kisi hija 4.1cm2, u l-volum tas-soluzzjoni tal-kisi huwa 400ul, allura d-dożaġġ rakkomandat huwa 2ug/cm2. Imbagħad 8.2 ug ta 'PLL hija meħtieġa f'bir wieħed. Jekk jiżdiedu biss 400 ul ta 'soluzzjoni PLL, il-konċentrazzjoni tas-soluzzjoni PLL hija 20.5 ug/ml (madwar 20 ug/ml). Għalhekk, is-soluzzjoni tal-istokk jeħtieġ li tiġi dilwita b'ilma ultrapur.
Passi speċifiċi:
1. Iddilwa s-soluzzjoni tal-istokk PLL 1:5 b'ilma ultrapur.
2. Żid 400 ul ta' dilwizzjoni PLL ma' kull dixx Petri tal-qiegħ tal-ħġieġ ta' 35 mm.
3. Inkuba għal 1-2 sigħat f'temperatura ambjentali u aspira d-dilwizzjoni tal-PLL.
4. Aħsel b'attenzjoni 3 darbiet b'2ml ta' soluzzjoni tal-PBS jew medju mingħajr serum, u aspira s-soluzzjoni tal-ħasil.
5. Żid direttament is-sospensjoni taċ-ċelluli għall-kultivazzjoni.
Evalwazzjoni tal-metodu
Minħabba l-proprjetajiet differenti ta 'diversi proteini tal-kisi, proteini tal-kisi differenti jintużaw b'modi differenti. Kontaminazzjoni ġdida ħafna drabi tinħoloq minħabba l-ħtieġa li d-dixxijiet tal-qiegħ tal-ħġieġ jiġu miksija. Barra minn hekk, il-kontaminazzjoni ħafna drabi tiġi skoperta wara li ċ-ċelloli jkunu tqajmu, li mhux biss idewwem iż-żmien, iżda wkoll taħli l-konsumabbli tal-kit. Wara kollox, reaġenti tal-proteini miksija u platti tal-qiegħ tal-ħġieġ ta 'kwalità assigurata huma għaljin (platti tal-qiegħ tal-ħġieġ ta' kwalità fqira jistgħu jnixxu minħabba li l-kolla ma twaħħalx jew il-kolla użata hija tossika għaċ-ċelloli).
Dixxijiet Petri konfokali mingħajr kisi
Għat-tfal li jridu jiffrankaw il-ħin u l-isforz, huwa aktar konvenjenti li tuża platti tal-kultura konfokali mingħajr kisi.
Fatturi li għandek tikkonsidra meta tagħżel dixx tal-kultura adattata huma: jekk huwiex adattat għaċ-ċelloli tiegħek stess biex jaderixxu magħhom, jekk il-karatteristiċi ottiċi tad-dixx tal-kultura jissodisfawx ir-rekwiżiti konfokali.
Dixxijiet Petri li jissodisfaw ir-rekwiżiti tal-fatturi ta 'hawn fuq mhumiex limitati għal platti tal-qiegħ tal-ħġieġ miksija. Fil-fatt, kulħadd jaf li d-dixxijiet tal-plastik huma orħos u eħfef għaċ-ċelloli biex jaderixxu magħhom mill-ħġieġ. Hawn eżempju ta 'dixx tal-kultura konfokali minn Shanghai Jingan, biex titkellem dwar il-parametri li dixx tal-kultura li huwa adattat għal esperimenti konfokali jeħtieġ li jkollu:
Wieħed jista 'jara li l-parametri fiżiċi ta' platti tal-kultura konfokali li jissodisfaw ir-rekwiżiti ta 'użu dirett huma qrib ħafna tal-ħġieġ, iżda fl-istess ħin, għandhom ukoll proprjetajiet idrofiliċi, li jistgħu jagħmlu l-biċċa l-kbira taċ-ċelloli jaderixxu aħjar; u d-duttilità huma aħjar mill-ħġieġ. Jippermetti li l-biċċa l-kbira tal-linji taċ-ċelluli u ċ-ċelloli primarji jaderixxu direttament mal-ħajt, u mhux fraġli, li hija għażla tajba.
Tista 'ssib ukoll id-dixx tal-kultura konfokali l-aktar adattat għall-esperiment tiegħek skont ir-rekwiżiti sperimentali speċifiċi tiegħek u l-parametri fit-tabella ta' hawn fuq.
Evalwazzjoni tal-metodu
L-għażla ta 'dan it-tip ta' dixx petri ma teħtieġx kisja addizzjonali, u tnaqqas ħafna r-riskju ta 'kontaminazzjoni. U peress li l-qiegħ tal-plastik huwa aktar faċli biex taħdem miegħu, m'hemmx bżonn ta 'kolla biex tiffissa mal-qiegħ tad-dixx petri. Elimina l-possibbiltà ta 'tnixxija jew ċitotossiċità.
