Applikazzjoni tal-flixkun tas-serum
Il-flixkun tas-serum huwa magħmul minn ħġieġ borosilikat b'estrazzjoni baxxa, u l-flixkun ċar bla kulur jissodisfa r-rekwiżiti ta 'USP Tip I u ASTM E 438 Tip I Standard Klassi A. Jista' jiġi awtoklavat f'121 grad għal 20min, u jista 'jinqasam f'125ml , 250ml, 500ml, 1L, 2L skond il-volum.
Flixkun tas-serum huwa kontenitur għall-ħażna tas-serum, li ġeneralment huwa magħmul minn materjal tal-PET permezz ta 'proċess ta' nfiħ ta 'stirad ta' injezzjoni. Il-medju huwa n-nutrijent meħtieġ għat-tkabbir taċ-ċelluli. Skont is-sors tiegħu, huwa maqsum f'medju sintetiku u medju naturali, li t-tnejn jistgħu jinħażnu fi fliexken tas-serum.
Flixkun tas-serum
Medju naturali:
Il-mezz naturali l-aktar użat huwa s-serum, bażikament is-serum tal-għoġol. Is-serum fih varjetà ta 'fatturi ta' tkabbir taċ-ċelluli, fatturi li jippromwovu l-adeżjoni u s-sustanzi multi-attivi tagħhom. Flimkien ma 'medja sintetika, iċ-ċelloli jistgħu jipproliferaw u jikbru bla xkiel. Is-serum jeħtieġ li jinħażen fi fliexken tas-serum speċjali fi grad -5 sa -20 grad .
Medju sintetiku:
Il-medju sintetiku huwa fformulat b'mod strett skond it-tip u l-kwantità ta 'sustanzi meħtieġa miċ-ċelloli. Hemm ħafna tipi u komponenti magħrufa, li jiffaċilita l-kontroll tal-kundizzjonijiet sperimentali. Fih karboidrati, aċidi amminiċi, lipidi, melħ inorganiku, vitamini, oligoelementi u fatturi tat-tkabbir taċ-ċelluli. Madankollu, meta mqabbla mal-medju naturali, xi komponenti naturali mhux magħrufa ma jistgħux jiġu sostitwiti b'komponenti kimiċi magħrufa. Għalhekk, il-mezz sintetiku bażiku użat fil-kultura taċ-ċelluli għandu jżid ukoll ċertu ammont ta 'komponenti medji naturali biex jegħleb il-kultura sintetika. Bażi insuffiċjenti, l-aktar prattika komuni hija li żżid is-serum tal-għoġol.
Il-forma tal-flixkun tas-serum hija kwadra, faċli biex tinqabad, reżistenti għall-biċċa l-kbira tal-korrużjoni tal-aċidu u tal-alkali, it-temperatura tal-fraġilità hija -70 grad, u għad għandha ċerta toughness fi -30 grad. Huwa kontenitur tal-ippakkjar tajjeb, kemm jekk huwa medju naturali jew kultura sintetika. jistgħu jinħażnu fi fliexken tas-serum.
Għall-iżolament, il-kultura u l-identifikazzjoni ta 'ċelluli proġenitriċi endoteljali tad-demm tal-kurdun taż-żokra tal-bniedem u l-istabbiliment ta' scaffolds vaskulari aċellulari permezz ta 'metodu mtejjeb ta' ffriżar u tinħall.
Biex tesplora l-fattibilità u l-valur ta 'applikazzjoni klinika ta' ċelluli proġenitriċi endoteljali iżolati u kkultivati minn demm tal-kurdun taż-żokra tal-bniedem.
Metodi: Id-demm tal-kurdun taż-żokra tal-feti li għaddejjin minn sezzjoni ċesarja għal żmien sħiħ fid-Dipartiment tal-Ostetrija u l-Ġinekoloġija, inġabar l-Ewwel Sptar Affiljat tal-Kulleġġ Mediku Bengbu, imqiegħed fi flixkun tas-serum li fih 50U/ml eparina taħt kundizzjonijiet asettiċi, maħżuna f'kaxxa tas-silġ ta '4 gradi, u ttrasportati lejn ċelloli Fil-kamra tal-kultura, iċ-ċelloli mononukleari tad-demm tal-kurdun taż-żokra nkisbu permezz ta' ċentrifugazzjoni tal-gradjent tad-densità. Iċ-ċelloli mononukleari miksuba ġew maqsuma f'żewġ partijiet, u medja M199 tas-serum tal-għoġol tal-fetu (FCS-M199) u medju M199 tas-serum awtologu (AS-M199). U kienu miżrugħa fi platti tal-kultura bi u mingħajr fibronectin uman (HFN) (immarkati bħala: F(0), F(1), A(0), A(1)) rispettivament. Twettqu induzzjoni, differenzjazzjoni u espansjoni in vitro.
Il-bidliet morfoloġiċi taċ-ċelloli aderenti matul il-proċess kollu ta 'induzzjoni u differenzjazzjoni ġew osservati, u ġew identifikati minn angoli differenti flimkien ma' tekniki relatati bħal immunoistokimika, immunofluworexxenza u ċitometrija tal-fluss.
Riżultati: Wara 12-il jum ta 'kultura, iċ-ċelloli mononukleari tad-demm tal-kurdun bdew jaderixxu. Wara 3d, bdiet tidher il-forma tal-magħżel, u mbagħad in-numru ta 'ċelloli aderenti żdied gradwalment u gradwalment sar forma ta' magħżel. Meta kkultivata sa ġimgħa, kolonja tipika ffurmata b'ċelluli magħżel madwar u ċelluli tondi fiċ-ċentru. Meta ċ-ċelloli ġew ikkultivati għal 14-il jum, il-gruppi taċ-ċelloli interkonnessi konnessi gradwalment u ffurmaw struttura bħal netwerk. Fl-istess ħin, biż-żieda kontinwa tal-ħin tal-kultura, iċ-ċelloli tal-magħżel twal bdew ukoll iqassru gradwalment, u wrew bidla tipika bħal ġebel tal-pavimentar.
Iċ-ċelloli aderenti ġew ikkultivati għal ġimgħa u ġie osservat li n-numru ta 'ċelloli fil-medju b'fibronektin uman kien ogħla b'mod sinifikanti minn dak mingħajr fibronectin uman, u ma kien hemm l-ebda bidla sinifikanti fin-numru ta' ċelloli fiż-żewġ mezzi differenti.
