Ir-reazzjoni tal-katina tal-polimerażi (PCR) hija waħda mill-aktar metodi magħrufa fil-laboratorji tax-xjenza tal-ħajja.
Il-pjanċi tal-PCR huma magħmula minn plastik tal-ewwel klassi għal immaniġġjar u analiżi eċċellenti ta 'kampjuni jew riżultati miġbura.
Għandhom ħitan irqaq u uniformi li jipprovdu trasferiment preċiż tas-sħana.
Bi tħejjija għal applikazzjoni f'ħin reali, frazzjonijiet ċkejkna ta 'DNA jew RNA huma iżolati u maħżuna fi pjanċi PCR.
Il-pjanċi PCR huma effiċjenti ħafna fis-siġillar bis-sħana u jirrestrinġu wkoll il-fluss tas-sħana.
Madankollu, minħabba li l-pjanċi PCR huma effiċjenti u affidabbli, huma suxxettibbli għal żbalji u ineżattezzi meta jipproċessaw il-kampjuni.
Mela jekk inti interessat li tikseb pjanċi PCR ta 'kwalità tajba. L-aħjar huwa li tikkuntattja manifattur affidabbli tal-pjanċa PCR. B'dan, tista 'tkun żgur li tikseb l-aħjar prezz.
Hawn taħt hemm xi prekawzjonijiet biex tiġi evitata l-kontaminazzjoni ta 'reaġenti jew kampjuni u biex jiġu evitati riżultati mhux preċiżi.
Iddiżinfetta l-ambjent
Riżultati pożittivi jew negattivi żbaljati minħabba l-preżenza ta 'impuritajiet jistgħu jġiegħlek tiddubita mir-riżultati.
L-impuritajiet u l-kontaminanti jiġu f'diversi forom, bħal DNA mhux relatati jew addittivi kimiċi, li fl-aħħar mill-aħħar inaqqsu l-effiċjenza u l-effettività tar-reazzjoni.
Hemm ħafna modi biex titnaqqas ħafna r-rata ta 'kontaminazzjoni tal-pjanċi PCR.
L-użu ta 'ponot tal-filtri sterilizzati huwa mod ieħor utli biex jipprevjeni li l-impuritajiet jidħlu fil-kampjun permezz tal-pipetta.
Sett ta 'tagħmir kompletament nadif, inklużi pipetti u xtillieri, huwa pprovdut speċifikament għall-użu tal-PCR. Dan jiggarantixxi trasferiment negliġibbli ta 'impuritajiet jew kontaminanti madwar il-laboratorju.
Uża bliċ, etanol fuq pipetti, xtillieri, u bankijiet biex timsaħ il-kontaminazzjoni.
Alloka spazju riżervat għar-reazzjonijiet PCR kollha biex tnaqqas aktar il-kontaminazzjoni tal-partikuli.
Uża ingwanti nodfa f'kull pass u ibdelhom spiss.
Pjanċa PCR
Iċċekkja l-konċentrazzjoni u l-purità tal-mudell.
L-indafa tal-bankijiet u t-tagħmir użat biex jiġu analizzati l-kampjuni bl-użu tal-PCR għandha tinżamm. Huwa kritiku li tivverifika l-purità tal-kampjuni qabel l-analiżi u l-ipproċessar.
Tipikament, l-analizzatur iqis il-konċentrazzjoni u l-livell ta 'purità tal-kampjun tad-DNA.
Il-proporzjon ta 'assorbiment ta' 260nm/280nm m'għandux ikun inqas minn 1.8. L-impuritajiet imbagħad ġew identifikati bl-użu ta 'wavelengths bejn 230nm u 320nm.
F'eżempju wieħed, ġew skoperti melħ kaotropiku u komposti organiċi oħra f'assorbiment ta '230 nm. Fl-istess ħin skopra u vverifika t-turbidità fil-kampjuni tad-DNA f'assorbenza fi 320nm.
Evita tagħbija żejda pjanċi u prodotti tal-PCR
Għalkemm huwa mixtieq li jitħaddmu prodotti multipli fl-istess ħin, jista 'jwassal għal kontaminazzjoni inkroċjata tal-pjanċi PCR.
It-tagħbija żejda tal-pjanċi tal-PCR bi prodotti differenti hija ta 'ħela u tagħmilha diffiċli biex jiġu identifikati kampjuni.
Żomm rekords ta' alikwoti ta' reaġenti PCR
Ċikli kontinwi ta' ffriżar/tidwib u użu frekwenti ta' alikwoti jistgħu jagħmlu ħsara lir-reaġenti tal-PCR, l-enżimi u d-DNTPs permezz tar-rikristallizzazzjoni.
Dejjem istinka biex tissorvelja r-rata ta' alikwoti użati meta tħejji kampjuni għall-analiżi.
Il-LIMS preferut huwa aktar adattat għall-kontroll ta 'ħażniet u kwantitajiet ta' reaġenti u kampjuni li għandhom jiġu ffriżati jew imdewweb.
Agħżel l-aħjar temperatura ta 'ttemprar.
L-għażla u l-użu tat-temperatura tal-ittemprar ħażina huwa mod ieħor li r-riżultati tal-PCR fihom żbalji.
Xi drabi r-rispons ma jmurx kif ippjanat. It-temperatura ta 'l-ittemprar jeħtieġ li titbaxxa biex tippromwovi reazzjoni ta' suċċess.
Madankollu, it-tnaqqis tat-temperatura jżid iċ-ċans ta 'pożittivi foloz u primer-dimers.
Meta tuża pjanċi PCR, huwa importanti li tikkonferma l-analiżi tal-kurva tat-tidwib peress li hija indikatur tajjeb għall-għażla tat-temperatura ta 'l-ittemprar korretta.
Is-softwer tad-disinn tal-primer jgħin id-disinn, jipprovdi t-temperatura ta 'l-ittemprar korretta, inaqqas direttament l-iżbalji fil-pjanċi PCR.
pjanċa pcr
